一、氮氣置換：初步降低氧氣濃度

1. 密封與準備

• 放置必要附件（如離心機、培養(yǎng)皿）和干燥劑（如分子篩干燥劑）于操作室內(nèi)，并放入?yún)捬踔甘緞ㄈ缑捞m指示紙）。

• 密封手套：將乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊，防止氣體泄漏。

• 抽真空校驗：關(guān)閉取樣室內(nèi)外門，抽真空至壓力低于0.06MPa（或500毫米汞柱），驗證氣密性。

2. 氮氣充入與排放

• 接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥，使手套鼓起后關(guān)閉閥門，扎緊袋口。

• 將氮氣緩慢釋放至操作室內(nèi)，重復此過程至少2次，每次充氮前需對取樣室抽真空，并用腳踏開關(guān)開閉排氣閥，確保氧氣濃度初步降低。

二、混合氣體置換：進一步消除殘留氧氣

1. 混合氣體配比

• 混合氣體通常由氮氣（N?，85%-90%）、氫氣（H?，5%-10%）和二氧化碳（CO?，5%）組成。

• 氮氣作為惰性氣體提供無氧環(huán)境；氫氣與殘留氧氣在催化劑作用下反應(yīng)生成水；二氧化碳維持適宜pH，模擬厭氧菌自然生存環(huán)境。

2. 充入與流量控制

• 調(diào)換氣路，打開混合氣體閥進氣，充氣時取樣室需先抽真空，并隨時用腳踏開關(guān)開閉排氣閥。

• 混合氣體充滿塑料袋后，關(guān)閉直通閥，打開流量計閥門，調(diào)整流量至每分鐘10ml左右。

• 重復混合氣體置換2-3次，確保操作室內(nèi)氣體含氧量降至極微量狀態(tài)（通常低于0.1%）。

三、催化除氧：徹底消除痕量氧氣

1. 催化劑作用

• 打開操作室內(nèi)的除氧催化器電源，利用鈀催化劑將密閉箱體內(nèi)的氧氣與混合氣體中的氫氣催化生成水：

• 催化反應(yīng)持續(xù)1小時后，觀察美蘭指示紙顏色變化。若指示紙不變色（保持無色或淺藍色），表明操作室內(nèi)已達到厭氧環(huán)境（氧氣濃度低于檢測限）。

2. 滅菌與維護

• 開啟紫外線燈對操作室進行滅菌處理，滅菌時間根據(jù)實驗要求自定（通常15-30分鐘）。

• 連續(xù)使用厭氧培養(yǎng)箱時，需定期檢查和補充除氧劑（如鈀粒）和干燥劑，確保室內(nèi)厭氧條件的維持。

• 長期實驗需每天觀察厭氧指示條，若變色則需重新?lián)Q氣；同時連續(xù)輸入微量混合氣體（流量約10ml/min），通過催化吸收補進的微量氧氣，保證室內(nèi)厭氧狀態(tài)。

四、關(guān)鍵注意事項

1. 氣體壓力控制

• 置換過程中需嚴格控制氣體輸入壓力（通常為0.1MPa左右），以防爆管或損壞設(shè)備。

• 取樣室充氮置換時，若選定真空度較低，需增加置換次數(shù)以確保氧氣徹底排除。

2. 安全操作規(guī)范

• 氫氣具有爆炸性，需控制其濃度（通常<10%）并配備安全報警裝置。

• 調(diào)換氣瓶時需扎緊氣管，避免含氧氣體流入；真空泵需定期檢查加油，確保正常運行。

3. 環(huán)境適應(yīng)性

• 儀器應(yīng)安裝于空氣清凈、溫度變化較小的地方，避免外界環(huán)境干擾。

• 開機前需熟悉各配套儀器、儀表的使用說明，掌握正確操作方法。